拟南芥AtGrp7RRM结构域的纯化及其结构与结合的初步分析(英文)

Purification of the AtGrp7 RRM Domain from Arabidopsis thaliana and Its Preliminary Structure and Binding Analysis

二维码有效期 120s

摘要富含甘氨酸的RNA结合蛋白AtGrp7是拟南芥(Arabidopsis thaliana)调节生物钟负反馈回路的组分.在使用常规方法纯化AtGrp7 RRM结构域的初始试验中,观察到烟草蚀纹病毒(TEV)酶切后AtGrp7 RNA识别基序(RRM)结构域的紫外吸收峰为蛋白和杂质的混合信号峰.为解决常规纯化中的杂质问题,对AtGrp71-90应用了变性-复性两步纯化方法.AtGrp7 RRM结构域的1H-15N HSQC指纹谱和CS-Rosetta模型结构表明快速稀释重折叠后其结构完全恢复.等温滴定量热法(ITC)和核磁共振(NMR)滴定实验进一步证实,重折叠后AtGrp71-90 RRM结构域具有正确结合RNA/DNA的功能.

作者迟秀娟 ^[1] 乔晓亚 ^[2] 刘颖 ^[3] 刘惠丽 ^[4] 陈雷 ^[4] 王际辉 ^[5] 艾选军 ^[2] 学术成果认领

作者单位大连工业大学生物工程学院,辽宁大连116034;洁净能源国家实验室(中国科学院大连化学物理研究所),辽宁大连116023 ^[1] 洁净能源国家实验室(中国科学院大连化学物理研究所),辽宁大连,116023 ^[2] 国家艾滋病性病防治中心,病毒与免疫研究室,北京102206 ^[3] 波谱与原子分子物理国家重点实验室,武汉磁共振中心(中国科学院武汉物理与数学研究所),湖北武汉430071 ^[4] 大连工业大学生物工程学院,辽宁大连,116034 ^[5]

关键词变性-复性快速稀释核磁共振(NMR)AtGrp7RNA识别基序(RRM)结构域结合分析 denaturing-refolding quick-dilution nuclear magnetic resonance (NMR)AtGrp7 RNA recognition motif (RRM) domain binding analysis

分类号 O482.53

栏目名称 研究论文

DOI 10.11938/cjmr20182637

发布时间 2019-06-10

基金项目

The Liaoning Natural Science Foundation Project Supported by the State Key Laboratory of Magnetic Resonance and Atomic and Molecular Physics