换一批利用pET-29b载体进行葡激酶基因表达与其产物的亲和纯化
Expression and affinity purification of recombinant staphylokinase using pET-29b vector
摘要目的:探讨6聚组氨酸序列与葡激酶基因序列融合表达及其表达产物的纯化方法.方法:将葡激酶的cDNA序列连入pET-29b质粒,转入E.coli BL21(DE3)进行表达.应用镍金属离子螯合层析及凝胶过滤层析法纯化表达产物,采用溶圈法对纯化产物进行生物学活性测定.结果:6聚组氨酸与葡激酶的可溶性融合蛋白在BL21(DE3)中的表达量约占菌体可溶性蛋白总量的25%;螯合层析纯化后其纯度可达90%以上;再应用Sephacryl S-200HR可使其纯度提高到98%以上;测得其比活性为5.0×10 4 AU·mg -1 .结论:利用pET-29b载体成功进行了重组葡激酶基因的表达及其表达产物的亲和纯化.
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主题词
色谱法(Chromatography)组氨酸(Histidine)基因表达(Gene Expression)葡糖激酶(Glucokinase)重组蛋白质类(Recombinant Proteins)
分类号
Q78
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1671-587X.2004.06.009
发布时间
2005-01-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家科技攻关项目（96-C02-01-04）
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