换一批乌苏里蝮蛇丝氨酸蛋白酶基因克隆和序列分析
Cloning and sequence analysis of serine proteinase of Gloydius ussuriensis venom gland
摘要目的:构建乌苏里蝮蛇(Gloydius ussuriensis)毒腺cDNA文库,克隆、分析丝氨酸蛋白酶基因,为进一步基因研究和操作奠定基础.方法:采用链转化法和长距离PCR技术,构建乌苏里蝮蛇毒腺cDNA文库.用TRIzol试剂盒从乌苏里蝮蛇毒腺提取总RNA,再用Oligo(dT)-生物素-链菌素-磁珠法从总RNA中分离mRNA,反转录合成cDNA第一链,长距离PCR合成第二链cDNA.回收cDNA,用限制性内切酶消化产生粘性末端,层析去除小于500 bp片段,纯化的cDNA插入载体pBluescript-sk,电转化E.coli DH5α,得到乌苏里蝮蛇毒腺cDNA文库,测定丝氨酸蛋白酶上游氨基酸序列,并推导其基因序列,合成引物.从该cDNA文库克隆丝氨酸蛋白酶基因,并进行序列测定和分析.结果:该文库库容为2.3×106,该cDNA文库为筛选新的目的基因和进一步基因操作提供了有效平台.序列测定和分析显示丝氨酸蛋白酶基因开框读码序列全长702个核苷酸,编码234个氨基酸,活性中心His41、Asp86、Ser180和6对二硫键进化上高度保守.结论:该文库库容大于通用的105标准,符合规定可作为进一步基因操作平台,克隆的丝氨酸蛋白酶基因与GeneBank中其他蛇毒丝氨酸蛋白酶氨基酸序列同源性在85%以上.
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栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1671-587X.2005.03.001
发布时间
2005-08-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（39870375）
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