换一批
换一批摘要目的:构建结核分支杆菌分泌蛋白磷酸盐特异转运系统1(PstS1)的重组卡介苗.方法:以结核分支杆菌H37Rv基因组为模板,通过PCR扩增获得PstS1基因序列;将PstS1基因与大肠杆菌-卡介苗穿梭表达质粒PMD31重组,得到S-PMD31重组质粒,对S-PMD31重组质粒进行HindⅢ、BanH Ⅰ双酶切及测序鉴定,转化大肠杆菌,用IPTG对工程菌株进行诱导表达,并通过电穿孔技术将S-PMD31重组质粒导入卡介苗中构建重组卡介苗.结果:用引物P1、P2对结核分枝杆菌H37Rv基因组进行PCR扩增获得长为1 100 bp的PstS1基因序列,S-PMD31重组质粒的HindⅢ、BanHⅠ双酶切及测序鉴定证实:PstS1基因正确插入载体PMD31中,并能在大肠杆菌中诱导表达.通过质粒提取及PCR扩增表明重组质粒正确导入卡介苗中.结论:成功地构建了PstS1重组卡介苗,预期能提高卡介苗的免疫原性和保护力.
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