换一批大肠杆菌β-半乳糖苷酶ED和EA的克隆、表达及活性测定
Cloning,expression and activity assay of ED/EA of β- galactosidase in E.coli
摘要目的:制备大肠杆菌β-半乳糖苷酶(β-galactosidae)酶供体(ED)和酶受体(EA)片段,获得具有全酶活性的β-半乳糖苷酶.方法:以pSV-β-galactosidase control vector为模板设计引物,用PCR方法获得ED和EA片段DNA序列,插入克隆载体pGEM-T-easy中,获得重组质粒,经酶切、PCR及测序鉴定正确后,将酶切目的片段分别插入原核表达载体pET20b~+,并转化大肠杆菌BL21,通过IPTG诱导表达出ED、EA融合蛋白,以亲和层析纯化蛋白,通过ED与EA蛋白形成β-半乳糖苷酶、全酶活性试验来判断ED、EA的功能.结果:获得与pSV-β-galactosidase control vector一致的ED、EA碱基序列,构建了重组表达质粒pET20b-ED及pET20b-EA,并分别转化入大肠杆菌DE3,以IPTG诱导行SDS-PAGE电泳,在相对分子质量为14 000及116 000处分别可见ED蛋白和EA蛋白条带,应用镍凝胶亲和层析纯化获得目的蛋白.结论:成功地制备了ED、EA蛋白,形成全酶活性的β-半乳糖苷酶.
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栏目名称
发布时间
2010-04-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
吉林省科技厅重点项目资助课题（(20060417-1,20080435-1)）
吉林省长春市科技局计划项目资助课题（(长科技合2008254号,08YJ37)）
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