换一批含有RU486诱导系统的IL-2基因表达质粒的构建及功能鉴定
Construction and functional identification of interleukin-2 gene expression plasmid with RU486 inducible system
摘要目的: 构建含有RU486诱导系统的小鼠白细胞介素2 (IL-2) 基因表达质粒,研究RU486系统对IL-2基因表达的调控作用.方法: 用限制性内切酶Cla Ⅰ处理含有RU486诱导系统的质粒pRS17和编码IL-2基因的质粒pUC57-IL-2,将IL-2基因插入到pRS17构建pRS-IL-2;通过PCR及限制性酶切鉴定重组质粒;将重组质粒体外转染SMMC-7721细胞,用不同浓度的RU486进行处理;将重组质粒通过水流动力学注射法注射到小鼠体内,腹腔注射RU486进行诱导;通过ELISA方法检测细胞上清及血清中IL-2基因的表达.结果: 重组质粒pRS-IL-2经过限制性内切酶消化及PCR分析,显示了预期的片段.细胞在1×10-8 mol·L-1 的RU486诱导下,IL-2表达水平最高,是无RU486组的1.95倍(P<0.001).注射质粒后,接受RU486诱导的小鼠血清中IL-2水平较诱导前升高320倍,而未接受RU486的小鼠血清未检测到IL-2的表达.结论:成功构建了含有RU486诱导系统的IL-2基因表达质粒,IL-2基因的表达依赖于诱导剂RU486的存在.
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