换一批基于杂合肽H5LL活性的生物信息学分析和重组乳酸菌表达载体的构建
Bioinformatics analysis based on activity of heterotrimeric peptide H5LL and construction of recombinant Lactic acid bacteria expression vector
摘要目的:以人源性抗菌肽(AMPs)富组蛋白5(Hst5)和LL-37为亲本,设计新型杂合肽H5LL,并通过基因工程技术构建重组乳酸菌表达载体,实现AMPs的高效和安全表达.方法:采用生物信息学方法对H5LL进行理化参数、亲/疏水性、剪切位点、磷酸化位点、信号肽、跨膜区域、亚细胞定位和二级结构预测;将目的序列和空载质粒pMG36e经HindⅢ及KpnⅠ双酶切后,构建乳酸菌重组表达载体pMG36e-H5LL,克隆转化获得含目的基因的重组质粒.结果:H5LL成为AMPs的可能性较高,含36个氨基酸,相对分子质量为4625380,总电荷数为+10,具有亲水性;有3个磷酸化位点,无糖基化位点;属于膜内蛋白,无跨膜区域,无信号肽;亚细胞定位预测,线粒体靶向肽的可能性为0.333.二级结构中α-螺旋结构和β-转角占比分别52.78%及22.22%,三级结构中α-螺旋数量较多.含目的基因的重组质粒PCR电泳,于138 bp处有单一特异性条带;双酶切电泳,重组质粒在136和3500 bp处有清晰条带.结论:设计并合成的新型杂合肽H5LL具有较高稳定性、抑菌活性和低毒性;成功构建重组乳酸菌表达载体pMG36e-H5LL.
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关键词
富组蛋白5抗菌肽生物信息学乳酸菌表达载体Histatin5AntimicrobialpeptidesBioinformatics analysisLactic acid bacteriaExpression vector
分类号
Q939.9（应用微生物学）
栏目名称
DOI
10.13481/j.1671-587X.20230534
发布时间
2023-11-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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