摘要目的:探讨低剂量甲氨蝶呤(MTX)联合索拉非尼(SFN)对人骨肉瘤(OS)的抗肿瘤作用,并阐明其可能的作用机制.方法:体外培养4种人OS细胞(143B细胞、HOS细胞、U2OS细胞和MG63细胞),采用Western blotting法测定各种细胞中的血管内皮生长因子(VEGF)和血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)蛋白表达水平;建立人OS裸鼠皮下移植瘤模型,并将建模成功的20只BABL/C裸鼠随机分为对照组(给予2％二甲基亚砜+98％玉米油)、低剂量MTX组(给予2 mg·kg-1 MTX)、SFN组(给予 15 mg·kg-1 SFN)和联合用药组(给予 2 mg·kg-1 MTX+15 mg·kg-1 SFN),每组5只,测量各组小鼠肿瘤体积并绘制肿瘤生长曲线;HE染色观察4组小鼠肿瘤组织病理形态表现,免疫组织化学法检测各组小鼠肿瘤组织中VEGFR2、细胞增殖抗原Ki-67和缺氧诱导因子1(HIF-1)蛋白阳性表达率;人O S 143B细胞分别给予0、0.125、0.250、0.500、1.000、2.000和4.000 μmol·L-1MTX处理,CCK-8法检测各组143B细胞存活率,计算半数抑制浓度(IC50),并选取对143B细胞存活无影响的MTX浓度作为低剂量MTX;人OS 143B细胞分为对照组和低剂量MTX组(给予0和0.250 μmol·L-1 MTX处理),酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组143B细胞中VEGF水平.结果:与143B细胞比较,HOS细胞、U2OS细胞和MG63细胞中VEGF及VEGFR2蛋白表达水平明显降低(P＜0.001).裸鼠皮下移植瘤模型中,与对照组比较,SFN组和联合用药组小鼠皮下移植瘤体积减少(P＜0.001),与低剂量MTX组和SFN组比较,联合用药组小鼠皮下移植瘤体积减少(P＜0.01).免疫组织化学法,与对照组比较,联合用药组小鼠肿瘤组织中Ki-67、VEGFR2和HIF-1蛋白阳性表达率明显降低(P＜0.05).CCK-8法,0.250 μmol·L-1 MTX对143B细胞增殖无明显改变.ELISA法,与对照组比较,低剂量MTX组143B细胞中VEGF水平明显降低(P＜0.05).结论:低剂量MTX促进了 SFN对人OS的抗肿瘤作用,其可能是通过抑制OS细胞分泌VEGF进而增强SFN对人OS的抗肿瘤作用.