换一批上调miR-31表达通过Wnt/β-catenin信号通路对牙髓干细胞成骨分化的影响
Effect of up-regulation of miR-31 expression on osteogenic differentiation of dental pulp stem cells through Wnt-β/catenin signaling pathway
摘要目的:探讨微小RNA(miRNA)-31对牙髓干细胞(DPSCs)成骨分化的影响,并阐明其可能的作用机制.方法:将对数生长数期DPSCs分为对照组(不处理)、NC组(转染随机序列对照物miRNA)、Agomir组(转染miR-31模拟物agomiR-31)和联合组(转染miR-31模拟物agomiR-31m同时加入XAV939).转染48h后采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组DPSCs中miR-31表达水平,MTT法检测各组DPSCs增殖能力,茜素红染色法检测各组DPSCs中钙质沉积,碱性磷酸酶(ALP)染色法检测各组DPSCs成骨分化程度,Western blotting法检测各组DPSCs无翅型MMTV整合位点家族蛋白(Wnt)/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路相关蛋白表达水平.结果:对照组和NC组DPSCs中miR-31表达水平,24、48和72 h时细胞增殖能力,钙化区面积构成比和ALP活性比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).与对照组和NC组比较,Agomir组DPSCs中miR-31表达水平,24、48和72 h时细胞增殖能力,钙化区面积构成比和ALP活性均明显升高(P＜0.05).与Agomir组比较,联合组DPSCs中miR-31表达水平,24、48和72 h时细胞增殖能力,钙化区面积构成比和ALP活性均明显降低(P＜0.05).对照组和NC组DPSCs中糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、β-catenin和Runt相关转录因子2(Runx2)蛋白表达水平比较差异均无统计学意义(P＞0.05);与对照组和NC组比较,Agomir组DPSCs中GSK-3β蛋白表达水平降低(P＜0.05),β-catenin和Runx2蛋白表达水平升高(P＜0.05);与Agomir组比较,联合组DPSCs中GSK-3β蛋白表达水平升高(P＜0.05),β-catenin和 Runx2蛋白表达水平降低(P＜0.05).结论:上调miR-31可促进DPSCs增殖和成骨分化,其作用机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关.
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