摘要目的:探讨泽布替尼(BGB-3111)联合硼替佐米(Btz)对人多发性骨髓瘤(MM)细胞凋亡的影响,并阐明其可能的机制.方法:体外培养人MM U266、PS-R、RPMI8226、KMS28-PE、KMS28-BM和H929细胞,Western blotting法检测不同细胞中布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)蛋白表达水平.采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测0、10、20、30、40和50 μmol·L-1 BGB-3111处理的RPMI8226、U266及KMS28-BM细胞存活率.取对数生长期RPMI8226、U266和KMS28-BM细胞,分为对照组、BGB-3111 组、Btz组和 BGB-3111+Btz组,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中髓细胞白血病因子1(MCL-1)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相互作用细胞死亡介质蛋白(Bim)、磷酸化Bim(p-Bim)、P65、磷酸化P65(p-P65)、肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAF)2和肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导蛋白3(A20)蛋白表达水平.U266细胞分为A20过表达组(A20-OE组)和空载对照组(EV组),2组细胞各分为对照组、BGB-311组、BTZ组和BGB-311+BTZ组,转染相应质粒,采用Western blotting法检测各组细胞转染效率,流式细胞术检测过表达A20后各组细胞凋亡率.结果:Western blotting法检测,与KMS28-BM细胞比较,U266、RPMI8226和H929细胞中BTK蛋白表达水平均明显升高(P<0.05或P<0.01).CCK-8法检测,与0 μmol·L-1 BGB-3111组比较,10、20、30、40和 50 μmol·L-1 BGB-3111组RPMI8226细胞及U266细胞存活率均明显降低(P<0.05或P<0.01),20、30、40和50 μmol·L-1 BGB-3111组KMS28-BM细胞存活率均明显降低(P<0.01).与RPMI8226和U266细胞比较,20、30和40 μmol·L-1 BGB-3111组KMS28-BM细胞存活率均明显升高(P<0.05),选取10 μmol·L-1 BGB-3111用于后续实验.流式细胞术检测,与对照组比较,BGB-3111组、Btz组和BGB-3111+Btz组RPMI8226及U266细胞凋亡率均明显升高(P<0.05 或P<0.01);与BGB-3111 组和Btz组比较,BGB-3111+Btz组RPMI8226 及U266细胞凋亡率均明显升高(P<0.01);与对照组比较,Btz组和BGB-3111+Btz组KMS28-BM细胞凋亡率均明显升高(P<0.01);与BGB-3111组比较,BGB-3111+Btz组KMS28-BM细胞凋亡率明显升高(P<0.01);与EV组细胞比较,Btz组和BGB-3111+Btz组中A20-OE细胞凋亡率均明显升高(P<0.01).Western blotting法检测,与对照组比较,BGB-3111 组、Btz组和BGB-3111+Btz组RPMI8226细胞及U266细胞中Bim蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),Btz组和BGB-3111+Btz组RPMI8226 细胞及U266 细胞中MCL-1、p-Bim和 Bcl-2 蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);与BGB-3111组和Btz组比较,BGB-3111+Btz组RPMI8226细胞和U266细胞中Bim蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),MCL-1、p-Bim和Bcl-2蛋白表达水平均明显降低(P<0.05).与对照组比较,Btz组和BGB-3111+Btz组RPMI8226 及U266 细胞中p-P65 蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),TRAF2和A20蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);与BGB-3111组和Btz组比较,BGB-3111+Btz组RPMI8226和U266细胞中p-P65蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),TRAF2和A20蛋白表达水平均明显降低(P<0.05).与EV组比较,A20-OE组细胞中A20蛋白表达水平明显升高(P<0.01).结论:BGB-3111通过抑制BTK活性诱导MM细胞发生凋亡,并增强Btz的促凋亡作用,过表达A20增加MM细胞对联合用药的敏感性,其抗肿瘤作用可能与核因子κB(NF-κB)信号通路抑制有关.