换一批藏红花醛对体外高糖诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖、迁移和表型转变的抑制作用
Inhibitory effect of safranal on proliferation,migration and phenotypic transformation of vascular smooth muscle cells of rats induced by high glucose in vitro
摘要目的:探讨高糖诱导的藏红花醛对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖、迁移和表型转化的影响,阐明藏红花醛在糖尿病(DM)血管病变防治中的作用.方法:选择SD大鼠作为实验对象,取大鼠胸主动脉原代培养VSMCs,分为对照组、25 mmol·L-1 高糖(HG)组和HG+20、40和80 μmol·L-1藏红花醛组.对照组VSMCs不进行处理,25 mmol·L-1 HG组VSMCs给予25 mmol·L-1 HG预处理,HG+20、40和80 μmol·L-1藏红花醛组VSMCs在25 mmol·L-1 HG组处理的基础上再分别用20、40和80 μmol·L-1藏红花醛进行48 h干预.采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法确定藏红花醛合适浓度并检测各组VSMCs存活率,细胞划痕愈合实验检测各组VSMCs划痕愈合率,Transwell小室实验检测各组VSMCs迁移细胞数,免疫荧光法检测各组VSMCs中α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和兔抗骨桥蛋白(OPN)荧光强度,Western blotting法检测各组VSMCs中OPN、α-SMA和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达水平.结果:显微镜下可见,体外培养4 d时,胸主动脉组织块边缘有梭形或三角形细胞爬出,其中长梭形为最常见的形态;第14天时细胞逐渐铺满皿底,当细胞密度达到 80%～90%时,出现标志性的"谷峰状"生长状态.取第 3代细胞进行免疫荧光法鉴定,采用VSMCs特异性标记物α-SMA蛋白进行细胞免疫荧光染色,原代培养VSMCs中α-SMA蛋白均表达为阳性.CCK-8实验,与对照组比较,160 μmol·L-1 藏红花醛组VSMCs活性明显降低(P<0.01),即对VSMCs产生了毒性损伤.20、40和80 μmol·L-1 藏红花醛干预48 h后,VSMCs活性无明显变化,综合考虑藏红花醛的作用效果和毒性后,采用上述 3个浓度藏红花醛用于后续的细胞实验.经过48 h的干预,与对照组比较,25 mmol·L-1 HG组VSMCs活性升高(P<0.001);与25 mmol·L-1 HG组比较,HG+20、40和 80 μmol·L-1 藏红花醛组VSMCs活性降低(P<0.05).细胞划痕愈合实验和Transwell小室实验,干预48 h后,25 mmol·L-1 HG组VSMCs划痕愈合率明显高于对照组(P<0.01),穿过Transwell小室的穿膜细胞数明显增多(P<0.05);与25 μmol·L?1 HG组比较,HG+20、40和80 μmol·L-1 藏红花醛组VSMCs划痕愈合率降低(P<0.05),穿膜细胞数减少(P<0.05).免疫荧光染色,与对照组比较,25 mmol·L-1 HG组VSMCs中α-SMA蛋白荧光强度明显减弱(P<0.001),而OPN蛋白荧光强度明显增强(P<0.001);与25 mmol·L-1 HG组比较,HG+20、40和80 μmol·L-1藏红花醛组VSMCs中α-SMA蛋白荧光强度逐渐增加(P<0.05),OPN蛋白荧光强度逐渐减弱(P<0.05).Western blotting法,与对照组比较,25 mmol·L-1 HG组VSMCs中α-SMA蛋白表达水平降低(P<0.05),PCNA和OPN蛋白表达水平升高(P<0.01);与25 mmol·L-1 HG组比较,HG+20、40和80 μmol·L-1 藏红花醛组VSMCs中α-SMA蛋白表达水平升高(P<0.05),PCNA和OPN蛋白表达水平降低(P<0.05).结论:藏红花醛能够抑制高糖诱导的大鼠VSMCs的增殖、迁移和表型转换.
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