纹带棒杆菌SpaD多克隆抗体的制备及其对纹带棒杆菌强产膜株生物膜形成能力的抑制作用
Preparation of SpaD polyclonal antibody against Corynebacterium striatum and its inhibitory effect on biofilm formation ability of Corynebacterium striatum strains with strong biofilm production abilities
摘要目的:制备纹带棒杆菌(C.striatum)生物膜形成相关蛋白菌毛组装蛋白D(SpaD)多克隆抗体,分析其抑制C.striatum强产膜株生物膜形成的作用和潜在应用价值.方法:选取2011-2021年内蒙古医科大学附属医院住院患者临床标本中分离的117株C.striatum为研究对象.采用结晶紫染色法检测各菌株生物膜形成能力,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测SpaD编码基因spaD在C.striatum强产膜株中的分布.将C.striatum强产膜株分为对照组和蛋白酶K组,采用结晶染色法检测蛋白酶对C.striatum强产膜株生物膜形成能力的抑制作用.蛋白重组技术构建C.striatum SpaD重组蛋白,实验分为对照组和5及10 mg·L-1 SpaD重组蛋白组,采用结晶染色法检测SpaD重组蛋白对C.striatum强产膜株生物膜形成能力的抑制作用.并通过动物免疫获得兔抗SpaD多克隆抗体实验分为对照组和1∶400、1∶200及1∶100 SpaD多克隆抗体组,采用结晶紫染色法检测SpaD多克隆抗体对C.striatum强产膜临床株生物膜形成能力的抑制作用.结果:结晶紫染色法检测,强产膜株、中等产膜株和弱产膜株占比分别为 47.9%(56/117)、29.0%(34/117)及 23.1%(27/117).RT-qPCR法,所有强产膜株均携带spaD基因.与对照组比较,5和10 mg·L-1 SpaD重组蛋白组13株强产膜菌生物膜形成能力均明显降低(P<0.05).与对照组比较,1∶100和1∶200倍数稀释SpaD兔多克隆抗体组中分别有61.5%(8/13)及7.7%(1/13)的强产膜菌株生物膜形成能力明显降低(P<0.05).结论:spaD基因在C.striatum强产膜株中呈高表达状态.SpaD多克隆抗体可明显抑制C.striatum强产膜株生物膜形成,其抑制效应呈浓度依赖性.SpaD可作为防治C.striatum产膜株感染的新靶点.
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