换一批弓形虫硫氧还蛋白20的表达纯化、抗体制备和亚细胞定位分析
Expression purification,antibody preparation,and subcellular localization analysis of Toxoplasma gondii thioredoxin 20
摘要目的:对弓形虫硫氧还蛋白 20(Trx20)进行表达纯化、抗体制备和亚细胞定位分析,为弓形虫疫苗的研制提供参考.方法:采用生物信息学相关网站及软件对Trx20蛋白进行生物信息学分析,设计特异性引物进行目的片段扩增和原核表达载体构建,进行蛋白质的体外表达和纯化.免疫实验动物进行抗体制备,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测多克隆抗体效价,Western blotting法验证抗体的特异性和灵敏度以及确定该蛋白的天然表达情况,间接免疫荧光法(IFA)分析蛋白的亚细胞定位.结果:生物信息学分析,Trx20蛋白是一种较稳定的亲水性蛋白,分子式为C2172H3412N548O616S20,含有424个氨基酸,预测相对分子质量为47 700,理论等电点为8.55;预测该蛋白存在1个信号肽,无跨膜区,含有1个名为"Thioredoxin like Superfamily"的结构域,并含35个磷酸化位点、1个N-糖基化位点和17个抗原决定簇;二级结构中α螺旋占氨基酸总数的41.51％,无规则卷曲占39.86％;成功构建重组质粒pET-28a-Trx20和pGEX-4T-1-Trx20,实现了可溶性重组蛋白的表达和纯化;成功制备多克隆抗体,效价高达1:64 000,且对Trx20蛋白具有特异性识别能力;亚细胞定位,Trx20蛋白在虫体细胞质中广泛分布.结论:刚地弓形虫Trx20蛋白是一种含有磷酸化/糖基化修饰位点和硫氧还蛋白结构域,且为定位于虫体胞质中的分泌型蛋白质.
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关键词
刚地弓形虫硫氧还蛋白20亚细胞定位蛋白纯化多克隆抗体Toxoplasma gondiiThioredoxin 20Subcellular localizationProtein purificationPolyclonal antibody
分类号
S855.9
栏目名称
DOI
10.13481/j.1671-587X.20250615
发布时间
2025-12-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
辽宁省教育厅青年基金项目（JYTQN2023433）
辽宁省教育厅青年基金项目（JYTQN2023435）
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