摘要目的:通过在线网站和软件预测人源RNA解旋酶DHX37基因的功能结构域,构建其不同功能结构域缺失载体,并验证构建载体的正确性.方法:以人源DEAH-box解旋酶37(hDHX37)质粒作为模板,基于同源重组克隆技术,应用SnapGene V 6.0.2软件设计截短体ATP结合结构域(ΔATP binding)、C末端结构域(CTD)、HA2亚基(HA2)和Oligos/Accharide结合折叠域(O/A binding fold)的功能结构域特异性引物;采用高保真DNA聚合酶Prime STAR GXL polymerase进行PCR 扩增截短体目的片段ATP binding、c-terminal-1、c-terminal-2、HA2-1、HA2-2 和O/A binding fold;利用重组克隆试剂盒将截短体片段定向克隆至经双酶切的 pCMV-MCS-3×HA-Neo空载体;将重组载体转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞后,通过限制性内切酶Hind Ⅲ酶切、琼脂糖凝胶电泳和DNA测序验证功能结构域载体的正确性.结果:PCR 法扩增的目的片段ATP binding(2 148 bp)、c-terminal-1(1 326 bp)、c-terminal-2(1 269 bp)、HA2-1(2 205 bp)、HA2-2(894 bp)和O/A binding(2 583 bp)长度与设计一致;Hind Ⅲ单酶切突变质粒ΔATP binding、Δc-terminal、ΔHA2和ΔO/A binding fold,得到线性化DNA片段,长度分别为8 939、7 589、8 036、8 540和8 027 bp,产物条带大小均与设计相符.DNA测序Blast对比分析,ΔATP binding缺失ATP binding结构域(1～442)、Δc-terminal缺失c-terminal结构域(443～735)、ΔHA2缺失HA2结构域(736～861)和ΔO/A binding fold缺失O/A binding fold结构域(862～1 158),分别缺失1 326、879、375和891 bp,各突变质粒缺失的结构域位置和长度与设计完全一致.结论:成功构建hDHX37基因的ΔATP binding、Δc-terminal、ΔHA2和ΔO/A binding fold 4个不同功能结构域载体.