换一批抗新冠病毒木瓜样蛋白酶原核表达条件优化及多克隆抗体的制备与鉴定
Optimization of prokaryotic expression condition of SARS-CoV-2 papain-like protease and preparation and identification of polyclonal antibody
摘要目的:优化新型冠状病毒木瓜样蛋白酶(papain-like protease,PLpro)在大肠杆菌中的表达条件,并制备高特异性大鼠抗PLpro多克隆抗体.方法:通过优化诱导时间、诱导温度和IPTG诱导浓度,确定PLpro在大肠杆菌中的最佳表达条件,以HisTrapTM亲和层析柱分离纯化PLpro后,将其作为抗原免疫大鼠,制备抗PLpro 多克隆抗体,以酶联免疫吸附实验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和蛋白免疫印迹实验(Western blot)测定多克隆抗体的效价、抗原特异性和灵敏性.结果:PLpro 最佳诱导温度为 20℃、诱导时间为 10 h、IPTG 浓度为0.2 mmol/L;抗PLpro多克隆抗体的效价可达 1∶256 000,且具有良好的抗原特异性;抗PLpro多克隆抗体对抗原的检测限可达 12.5 ng,具有良好的灵敏性.结论:本研究成功地进行了PLpro在大肠杆菌中的表达条件优化及高特异性大鼠抗PLpro多克隆抗体的制备,为研究PLpro在新冠肺炎中的免疫学功能奠定了基础.
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关键词
新型冠状病毒木瓜样蛋白酶(PLpro)原核表达条件优化酶联免疫吸附实验多克隆抗体SARS-CoV-2Papain-like proteaseProkaryotic expressionCondition optimizationELISAPolyclonal antibody
栏目名称
DOI
10.16833/j.cnki.jbmc.2024.01.015
发布时间
2024-01-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（81703546）
安徽省自然科学基金（1808085QH265）
安徽省高等学校自然科学研究项目（KJ2019ZD30）
安徽省高等学校自然科学研究项目（KJ2021A0839）
安徽省高等学校自然科学研究项目（YJS20210549）
皖南医学院青年骨干人才资助项目（wyqnyx202104）
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