换一批鲍曼不动杆菌5075株Hcp基因的蛋白生物信息分析及原核表达载体的构建
Proteinbioinformatics analysis of the Hcp gene and construction of prokaryotic expression vector in Acinetobacter baumannii strain 5075
摘要目的:构建鲍曼不动杆菌5075 株溶血素共调节蛋白(Hcp)基因的原核表达载体,完成蛋白的高效表达与纯化.方法:在Hcp蛋白生物信息分析的基础上,通过PCR方法扩增目的基因,对目的片段和pET-28a(+)质粒分别进行BamHⅠ和XhoⅠ位点的双酶切后连接并转化DH5α大肠埃希菌,于含抗卡那霉素的LB固体培养基上筛选,随机挑取单菌落进行菌落PCR鉴定及测序鉴定.将测序正确的pET-28a(+)-Hcp重组质粒再次转化E.coli BL21(DE3)中,探索合适的诱导条件.IPTG诱导Hcp蛋白分别在 37℃和 18℃进行表达,再采用BeyoMagTM His标签蛋白纯化琼脂糖磁珠(NTA-Ni)纯化目的蛋白.结果:Hcp蛋白的生信分析显示,鲍曼不动杆菌Ab5075_Hcp基因编码167 个氨基酸,蛋白质分子式为C833H1278N228O260S3,理论蛋白分子量大小为18.7 kDa,蛋白等电点为6.52,不稳定指数为32.86,脂肪族指数为67.13,亲水性平均值为-0.625,为亲水稳定蛋白.无跨膜区和信号肽,序列高度保守.二级结构主要有无规则卷曲和延伸链.Hcp蛋白亚细胞定位于细胞核,有 5 个潜在的B 细胞抗原表位.本研究成功构建Hcp基因原核表达载体,诱导表达后纯化获得大量可溶性Hcp蛋白,达到最适诱导条件为IPTG 0.5 mmol/L时,18℃下诱导15～16 h.结论:鲍曼不动杆菌Ab5075_Hcp蛋白在预测值合理范围内且纯化效果较好,适合用于制备抗体以及候选疫苗的实验.
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关键词
鲍曼不动杆菌原核表达蛋白纯化溶血素共调节蛋白Acinetobacter baumanniiProkaryotic expressionProtein purificationHemolysin coregulated protein
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DOI
10.16833/j.cnki.jbmc.2025.09.006
发布时间
2025-10-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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