芍药苷通过影响EGFR/RhoA通路在非小细胞肺癌A549细胞中的抗肿瘤活性

The antitumor activity of paeoniflorin in non-small cell lung cancer A549 cells via EGFR/RhoA pathway

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摘要目的:探究基于生信靶点和基础实验研究芍药苷(PF)对人非小细胞肺癌细胞(A549)的潜在抗肿瘤活性机制.方法:分别采用CCK-8实验、平板克隆实验、细胞划痕实验及流式细胞术实验检测PF对NSCLC细胞系A549生长、迁移和凋亡的影响;利用SwissTargetPrediction、PharmMapper和ChEMBL数据库检索PF的相关靶点,通过GeneCards、DisGeNET和OMIM数据库中检索NSCLC的靶点,使用STRING和DAVID数据库进行蛋白质-蛋白质分析与富集分析,运用SYBYL软件对排名前10靶点对应的蛋白质与PF进行分子对接,应用Western blot检测PF对p-AKT和p-EGFR和RhoA蛋白表达.结果:CCK-8和平板克隆实验表明PF能有效抑制肺癌细胞生长.50μmol/L和100μmol/L的PF在24 h对A549细胞的迁移率分别为22.89％、13.78％,低于空白组的55.85％(P<0.05).PF在24 h对A549细胞的凋亡率高于对照组(P<0.05).基因靶点预测与验证结果显示:PF与NSCLC的核心靶点为32个,对NSCLC富集分析发现,包含PI3K-AKT、MAPK、Ras、Rap1、雌激素、FoxO和VEGF信号通路等7条潜在作用通路.分子对接结果显示,与PF作用排名前三的蛋白质分别为RhoA、AKT和EGFR.与对照组相比,PF干预A549细胞后p-AKT和p-EGFR和RhoA的表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论:PF可能通过调控EGFR/RhoA通路抑制非小细胞肺癌A549细胞生长、迁移并促进其凋亡.