换一批乙脑/寨卡嵌合病毒包膜蛋白K283R突变对小鼠神经毒力的影响
Effect of the K283R mutation in JE/Zika chimeric virus envelope protein on neurovirulence in mice
摘要目的:探讨乙脑/寨卡嵌合毒株JE/ZIKV(MR766)包膜蛋白K283R突变对小鼠神经毒力的影响.方法:基于JE/ZIKV(MR766)嵌合病毒全长cDNA,通过重叠延伸PCR介导的定点突变及分子克隆技术,构建含包膜蛋白E第283位突变(K283R)的感染性全长克隆.经酶切鉴定后,通过XhoⅠ酶线性化全长感染性克隆并体外转录获得突变病毒RNA,经电穿孔转染BHK21细胞拯救出突变病毒JE/ZIKV(MR766)(K283R).通过病毒传代和测序、蚀斑实验、生长曲线、间接免疫荧光鉴定病毒特性,利用3周龄雌性昆明鼠脑内攻毒模型,解析嵌合病毒的神经毒力,以LD50量化神经毒力水平.结果:酶切验证确认成功构建JE/ZIKV(MR766)(K283R)全长感染性克隆.蚀斑实验、病毒测序及间接免疫荧光证实拯救目的病毒成功,其蚀斑直径大于亲本株JE/ZIKV(MR766)[(0.20±0.04 vs.0.14±0.03)cm,P<0.05].生长曲线显示,突变株与亲本株均在感染后60 h达到病毒滴度峰值.动物实验表明,JE/ZIKV(MR766)(K283R)的LD50为1.35 pfu/0.03 mL,稍低于亲本株(2.21 pfu/0.03 mL).结论:寨卡病毒E蛋白K283R突变未明显减弱嵌合病毒对小鼠的脑内神经毒力,提示该位点并非调控病毒毒力的关键位点.
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关键词
寨卡病毒乙脑病毒嵌合病毒包膜蛋白神经毒力Zika virusJapanese encephalitis virusChimeric virusEnvelope proteinNeurovirulence
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1005-3697.2026.01.001
发布时间
2026-01-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
川北医学院青年项目（CBY24-QNA16、CBY24-QNA23）
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