换一批SARS-CoV-2刺突蛋白RBD-Ferritin原核表达质粒的构建及其表达条件优化
Construction of SARS-CoV-2 RBD-Ferritin Prokaryotic Expression Plasmid and Optimization of Its Expression Conditions
摘要目的 构建并表达RBD-Ferritin原核表达质粒,优化重组蛋白RBD-Ferritin诱导表达条件及纯化鉴定方法.方法 利用柔性linker依次将RBDD614G、RBDBA.1 和Ferritin串联,Flag和6×His标签连接至Ferritin碳端,插入至pET32a(+)载体,构建重组质粒pET32a-RBDD614G-RBDBA.1-Ferritin-Flag-6His并转化入BL21(DE3)大肠埃希菌的感受态细胞中,通过优化诱导过程中异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)终浓度(0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mmol/L)、时间及温度(25℃诱导3、6、9 h;15℃诱导12、24、36 h),确定重组蛋白RBD-Ferritin的最佳诱导条件.经Ni-NTA镍柱纯化后的RBD-Ferritin蛋白溶液置于透析袋中,分别用含6、4、2、1 mol/L尿素的复性缓冲液进行复性.结果 经PCR及双酶切鉴定,成功构建出RBD-Ferritin原核表达载体.重组质粒转化菌成功诱导表达重组蛋白RBD-Ferritin,诱导的RBD-Ferritin蛋白相对分子质量约91 kDa,且在IPTG终浓度为0.4 mmol/L,25℃诱导6 h时表达量较高.结论 成功构建RBD-Ferritin原核表达质粒,且优化表达条件后可获得产量较高的重组蛋白RBD-Ferritin.
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关键词
质粒构建重组蛋白RBD-Ferritin原核表达条件优化蛋白纯化Plasmid constructionRecombinant protein receptor-binding domain(RBD)-FerritinProkaryotic expressionCondition optimizationProtein purification
分类号
R392（医学免疫学）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1674-2257.2025.04.005
发布时间
2025-07-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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