换一批多嘧啶束结合蛋白通过与内部核糖体进入位点的5'UTR结合增强寨卡病毒的翻译能力
Polypyrimidine Tract-Binding Protein Enhances Zika Virus Translation by Binding to the 5'UTR of Internal Ribosomal Entry Site
摘要目的 识别寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)5'非翻译区(5'untranslated region,5'UTR)的RNA结合蛋白,并探讨结合蛋白对位于ZIKV 5'UTR的内部核糖体进入位点(internal ribosomal entry site,IRES)活性及病毒产生的影响.方法 使用tRSA标记的ZIKV 5'UTR RNA捕获U251细胞中与之相互作用的蛋白,采用SDS-PAGE银染法获得tRSA-ZIKV 5'UTR RNA候选结合蛋白的条带.随后,利用液相色谱-串联质谱法、生物信息学分析和Western blot分析研究与ZIKV 5'UTR结合的候选蛋白.采用双顺反子表达实验和蚀斑形成实验分析结合蛋白对ZIKV IRES活性和ZIKV产生的影响.结果 tRSA RNA pull-down分析、液相色谱-串联质谱法和Western blot分析显示多嘧啶束结合蛋白(poly-pyrimidine tract-binding protein,PTB)为与ZIKV 5'UTR结合的蛋白.双荧光素酶报告基因检测结果显示:PTB过表达能显著增强ZIKV的IRES活性(t=10.220,P<0.001),而降低PTB表达则效果相反(t=4.897,P<0.01).此外,病毒噬斑形成实验表明:上调PTB表达能显著提高病毒滴度(t=6.400,P<0.01),而降低PTB表达水平则会削弱病毒的感染能力(t=5.055,P<0.01).结论 PTB对ZIKV 5'UTR发挥正向调节作用,能增强IRES活性和提高病毒产量.
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关键词
内部核糖体进入位点多嘧啶束结合蛋白寨卡病毒tRSA RNA pull-down双荧光素酶报告基因检测internal ribosomal entry sitepolypyrimidine tract-binding proteinZika virustRSA RNA pull-downdual-luciferase reporter assay
栏目名称
DOI
10.24920/004393
发布时间
2024-10-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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