换一批摘要目的:表达并纯化重组CP4-EPSP合成酶(CP4-EPSPS),研究重组CP4-EPSPS的免疫学活性;为进一步制备单克隆抗体和开发检测CP4-EPSPS的快速诊断试剂奠定基础.方法:诱导表达含转基因大豆CP4-EPSPS的重组载体pET-EPSPS,经Ni-NTA琼脂糖树脂亲和层析纯化,以ELISA、胶体金试条、Western杂交鉴定其免疫活性.结果:重组CP4-EPSPS以包涵体表达为主,上清表达量极低,但胶体金试纸条检测发现上清中CP4-EPSPS抗原活性强;复性包涵体的抗原性与上清的抗原性明显不同.采用扩大培养量、缩小超声破碎重悬体积的方法,从上清中纯化CP4-EPSPS获得成功,ELISA检测此重组抗原免疫小鼠血清抗体滴度可达到1:625,000;Western杂交证实重组抗原免疫血清与CP4-EPSPS标准品有较好的免疫反应性.结论:包涵体的简单复性方法难以恢复其关键的抗原决定簇的免疫原性;运用胶体金试纸条检测重组CP4-EPSPS活性,灵敏度高,简单快捷,对CP4-EPSPS特异检测相关的关键性抗原决定簇的甄别有重要作用,可指导重组抗原的纯化和在免疫学研究、特别是在单克隆抗体开发中的应用.
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栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.0253-3626.2006.01.003
发布时间
2006-04-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家科技攻关计划（2002AA215011）
中国科学院项目（非规范项目）（30400374）
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