换一批携带KGF基因重组腺病毒载体的构建与鉴定
Construction and identification of recombinant adenovirus vector of keratinocyte growth factor
摘要目的:构建携带角化细胞生长因子(Kemtinocyte growth factor,KGF)的腺病毒载体并观察其在细胞中的表达.方法:通过PCR从pcDNA3-KGFpIRES2-EGFP-KGF质粒中扩增出目的片段KGF,定向克隆至穿梭质粒载体pShuttle-CMV中,构建pShuttl-KGF.经酶切及测序鉴定后,再将KGF定向克隆至重组腺病毒骨架载体pAdxsi,构建携带KGF的重组腺病毒载体(pAdxsi-GFP-KGF).酶切鉴定正确后,转染人胚肾细胞系HEK293细胞,进行重组腺病毒的包装、生产及纯化,半数组织感染量法(50%tissue cuIture infective dose,TCID50)测定重组腺病毒滴度.用重组腺病毒及空病毒Ad-null(作为阴性对照)转染人肺腺癌细胞A549,荧光显微镜下观察细胞绿色荧光蛋白的表达,ELISA鉴定KGF的表达.结果:成功构建了携带KGF的重组腺病毒,纯化后病毒滴度达1.6×10mpfu/ml.Ad-KGF转染A549细胞后24h在荧光显微镜下即可观察到绿色荧光蛋白,48 h表达更强,ELISA实验证实细胞表达KGF.结论:成功构建了携带KGF的重组腺病毒,为下一步研究KGF用于肺纤维化治疗研究奠定了实验基础.
更多相关知识
医学主题词
细胞(Cells)胞间信号肽类和蛋白质类(Intercellular Signaling Peptides and Proteins)基因(Genes)荧光(Fluorescence)转染(Transfection)
分类号
R392（医学免疫学）
栏目名称
发布时间
2011-07-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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