摘要目的:构建转化生长因子β型受体Ⅰ (transforming growth factor beta receptor Ⅰ,TGFβRⅠ)基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体并在人胚肺成纤维细胞株MRC-5上鉴定其沉默效应.方法:构建4种针对人TGFβR Ⅰ基因不同干扰靶点的慢病毒干扰载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定,将筛选出的4种有效重组慢病毒干扰载体和其它辅助质粒一起共转染293T细胞并测定病毒滴度.最后将4种重组的慢病毒干扰载体分别感染MRC-5细胞,采用Real-time PCR和Western blot检测它们对靶基因的沉默效率.结果:经双酶切鉴定和DNA测序,证实短发夹RNA正确插入慢病毒载体且插入的序列正确.4种重组慢病毒干扰载体经293T细胞成功包装后,其病毒滴度分别为:siRNA-1 6.37×107 TU/ml、siRNA-2 1.65×108 TU/ml、siRNA-3 4.50×108 TU/ml、siRNA-4 2.31×108 TU/ml,阴性对照组载体包装后的病毒滴度为:1.79×109 TU/ml.4种重组慢病毒干扰载体感染MRC-5细胞的效率均为93％左右.与正常对照组和阴性对照组比较,在感染4种重组慢病毒干扰载体(siRNA-1～4)后,MRC-5细胞内TGFβR Ⅰ mRNA表达水平均明显下降(P=0.000),其中TGFβRⅠ-siRNA-2下降最明显,沉默效率最好.Western blot结果与qRT-PCR结果一致,4种重组慢病毒干扰载体均能使MRC-5细胞内TGFβR Ⅰ蛋白表达明显下降(=0.000),且TGFβR Ⅰ-siRNA-2干扰效率最大.结论:筛选并构建了能有效沉默TGFβR Ⅰ基因的最佳RNAi重组慢病毒载体——TGFβR-siRNA-2,从而为后续研究奠定基础.