换一批基于酵母双杂交技术的PRR11相互作用蛋白筛选与初步分析
Screening and preliminary analysis of PRR11 interacting proteins based on the yeast two-hybrid technique
摘要目的:采用酵母双杂交技术,筛选PRR11的相互作用蛋白,为深入研究其分子行为机制奠定基础.方法:句建用于酵母双杂交筛选的PRR11诱饵质粒并检测其自激活作用,根据结果进一步构建突变体获得具有较低自激活作用的突变体.对人胎脑cDNA文库进行筛选,获得初始阳性克隆.通过LacZ报告基因检测、回转验证、阳性克隆测序及BLAST序列比对分析,排除假阳性克隆和重复克隆,确定PRR11的候选相互作用蛋白.结果:PRR 11具有自激活作用,构建了一个较低自激活作用的PRR11突变体.通过酵母双杂交筛选,获得102个初始阳性克隆转化子.经LacZ报告基因检测,将阳性克隆锁定至39个.通过测序和序列比对分析,证实这39个克隆属于编码15种不同蛋白的基因.最终有RNF41等4个蛋白通过回转验证.结论:RNF41、SCG5、BCYRN1和PRR13是PRR11的潜在相互作用蛋白.
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分类号
R734.2（呼吸系肿瘤）
栏目名称
DOI
10.13406/j.cnki.cyxb.001960
发布时间
2019-07-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（81672301）
重庆市基础科学与前沿技术研究重点资助项目（cstc2017jcyjBX0069）
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