脑源性神经营养因子原核表达载体的构建及其生物学活性分析

Research on construction of prokaryotic expression vector of brain-derived neurotrophic factor and its biologic activity

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摘要目的：构建含有脑源性神经营养因子（BDNF）的原核表达质粒pET28a（＋）／BDNF及相应的原核表达菌，经异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达后研究其生物学活性。方法按照大肠杆菌BL21（DE3）的密码子偏好性进行密码子优化，人工合成大鼠BDNF的基因序列并构建原核表达质粒pET28a（＋）／BDNF。经限制性内切酶（Bam HI ，Hind Ⅲ）酶切鉴定及DNA测序鉴定后导入大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导表达后，用SDS‐PAGE检测重组蛋白的表达情况，以BDNF特异性抗体采用Western blot法鉴定BDNF蛋白抗原性，四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测BDNF蛋白对 PC12细胞活力的影响。结果构建的pET28a（＋）／BDNF经双酶切和测序鉴定与设计序列100％一致；工程菌经IPTG诱导后在相对分子质量17×103左右有1条明显蛋白条带，Western blot显示目的蛋白能够与特异性BDNF抗体反应；不同浓度BDNF蛋白处理组与对照组比较细胞活力均有不同程度的增加，其中50 ng／mL BDNF处理组效果最优。结论成功构建原核表达质粒pET28a（＋）／BDNF及相应的原核表达菌，该工程菌表达的BDNF蛋白具有良好的生物学活性。

作者 李健春 ^[1] 王丽 ^[2] 姜宁 ^[3] 王琼 ^[3] 学术成果认领

作者单位 西南医科大学药学院，四川泸州646000; 中西医结合防治器官纤维化实验室/中西医结合研究中心/西南医科大学附属中医医院，四川泸州646000 ^[1] 中西医结合防治器官纤维化实验室/中西医结合研究中心/西南医科大学附属中医医院,四川泸州,646000 ^[2] 西南医科大学药学院,四川泸州,646000 ^[3]

关键词脑源性神经营养因子原核表达生物学活性 brain-derived neurotrophic factor prokaryotic expression biologic activity

主题词生物学(Biology)脑源性神经营养因子(Brain-Derived Neurotrophic Factor)蛋白(Egg White)质粒(Plasmids)性(Sex)

分类号 R346

栏目名称 ?论著?

DOI 10.3969/j.issn.1671-8348.2016.20.001

发布时间 2016-08-10