基于磁性纳米富集DNA及滚环扩增技术检测PBMC内HBV cccDNA临床价值分析

Clinical analysis of the detection of hepatitis B virus cccDNA in peripheral blood mononuclear cells based on magnetic nano enrichment DNA and rolling ring amplification technique

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摘要目的探讨磁性纳米富集DNA及滚环扩增技术(RCA)检测外周血单个核细胞(PBMC)乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA (cccDNA)水平及其临床价值.方法选择西南医科大学附属医院98例HBV感染者为HBV组,另选择该院同期健康体检者100例为对照组.通过磁性纳米富集技术提取,RCA扩增、跨缺口引物介导的实时荧光定量PCR测定PBMC内HBV cccDNA;同时检测HBV DNA、HBsAg、HBeAg水平,取肝脏组织活检行炎症活动度、纤维化分期程度分级,并进行相关统计学分析.结果基于磁性纳米富集、RCA的检测技术能够测定PBMC内HBV cccDNA.HBV患者PBMC内HBV cccDNA阳性率为62.24％(61/98),伴肝衰竭、肝硬化患者PBMC内HBV cccDNA阳性率明显高于急性HBV、慢性HBV感染患者(P＜0.05).≥G2/S2期患者PBMC内HBV cccDNA量明显高于＜G2/S2患者(P=0.001),血清HBV DNA≥1×105 copies/mL患者PBMC内HBV cccDNA水平明显高于＜1×105 copies/mL患者(P=0.001).PBMC内HBV cccDNA量与血清HBV DNA、HBsAg、HBeAg(HBeAg阳性患者)水平呈明显正相关(r=0.437、0.338、0.521,P=0.000、0.001、0.001).抗病毒治疗24周[曲线下面积(AUC)=0.771,P=0.005]、48周(AUC=0.868,P=0.000)时PBMC内HBV cccDNA水平可对病毒应答明显预测.结论通过磁性纳米富集、RCA技术能够检测PBMC内HBV cccDNA,其水平与HBV疾病进展、血清感染标志物有一定关系,能够预测抗病毒治疗效果.

作者 王友强 ^[1] 郭永灿 ^[2] 兰由玉 ^[3] 魏聪 ^[2] 刘鹏 ^[4] 学术成果认领

作者单位 西南医科大学中西医结合学院,四川泸州646000;西南医科大学附属中医医院检验科,四川泸州646000 ^[1] 西南医科大学附属中医医院检验科,四川泸州,646000 ^[2] 西南医科大学附属医院风湿免疫科,四川泸州,646000 ^[3] 西南医科大学附属中医医院肝病科,四川泸州,646000 ^[4]

关键词磁性纳米富集滚环扩增肝炎病毒,乙型共价闭合环状DNA 外周血单个核细胞

主题词矮壮素(Chlormequat)细胞(Cells)肝炎病毒(Hepatitis Viruses)感染(Infection)血清(Serum)

分类号 R373.21

栏目名称 论著·基础研究

DOI 10.3969/j.issn.1671-8348.2019.09.005

发布时间 2019-06-19

基金项目

四川省卫生和计划生育委员会科研课题重点项目 西南医科大学-西南医科大学附属中医院联合专项项目