摘要目的 构建小鼠白细胞介素(IL)-35 基因表达质粒,探讨IL-35 表达对小鼠脾脏中CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群分化的影响.方法 采用PCR法扩增获得小鼠 IL-35 基因全长片段,将该片段连入鼠干细胞病毒载体(pMSCV-GFP)多克隆位点区,获得携带 IL-35 基因的质粒载体 pMSCV-IL-35-GFP.将 9 只雄性C57BL/6J 小鼠分为 3 组:PBS组、pMSCV组和 pMSCV-IL-35 组,分别向 3 组小鼠尾静脉注射 PBS、pMSCV-GFP空载质粒和pMSCV-IL-35-GFP质粒.72 h后分离小鼠脾脏,采用实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)检测IL-35 亚基 EB 病毒诱导基因 3(Ebi3)和 IL-12a mRNA 相对表达水平;采用流式细胞术检测 CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群百分比,并进一步检测CD8+T淋巴细胞免疫功能分子颗粒酶B(Gzmb)和调节性T淋巴细胞(Tregs)细胞特异转录因子叉头/翅膀状螺旋转录因子 3(Foxp3)mRNA相对表达水平.结果 RT-qPCR结果显示,与PBS组或pMSCV组比较,pMSCV-IL-35 组小鼠脾脏 Ebi3、IL-12a mRNA 相对表达水平均明显升高(P<0.001);流式细胞检测结果显示,与PBS组或 pMSCV组比较,pMSCV-IL-35 组小鼠脾脏 CD8+T 淋巴细胞百分比明显降低(P<0.001),而 CD4+CD25+Tregs 百分比明显升高(P<0.001),并且 Gzmb mRNA相对表达水平明显降低(P<0.01),Foxp3 mRNA相对表达水平明显升高(P<0.01).结论 IL-35 可以抑制效应性T淋巴细胞的活性,促进Tregs亚群分化发挥免疫调节作用,这将为 IL-35 基因应用于体内免疫治疗提供理论依据.