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miR-29b-3p介导HNF-4α抑制凝血因子X表达在创伤性凝血病的机制研究

Study on the mechanism of HNF-4α mediated by miR-29b-3p to inhibit the expression of coagulation factor Ⅹ in trauma induced coagulopathy

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摘要目的探讨微小 RNA(miR)-29家族在创伤性凝血病(TIC)中的功能作用及具体机制.方法采用生物信息学分析miR-29家族成员与肝细胞核因子-4α(HNF-4α)的靶向关系.HE染色结果、血栓弹力图(TEG)参数与凝血4项指标验证TIC大鼠模型构建情况.采用逆转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)及Western blot检测大鼠肝组织中miR-29家族、HNF-4α及凝血因子Ⅹ(FⅩ)表达情况;将过表达miR-29b-3p(miR-29b-3p mimics)或沉默 miR-29b-3p(miR-29b-3p inhibitor)转染至肝细胞,RT-qPCR及Western blot检测肝细胞中 miR-29b-3p、HNF-4α及FⅩ水平;双荧光酶报告基因实验验证 miR-29b-3p对HNF-4α的靶向调控作用;将 miR-29b-3p mimics和(或)HNF-4α过表达载体转染至肝细胞,RT-qPCR及Western blot检测肝细胞中miR-29b-3p、HNF-4α及FⅩ水平.结果 miRDIP数据库预测结果显示,miR-29家族中的miR-29a-3p、miR-29b-3p、miR-29b-5p、miR-29c-3p均被发现与HNF-4α存在结合位点.HE染色结果、TEG参数与凝血4项指标表明TIC大鼠模型构建成功.RT-qPCR及 Western blot检测显示,与对照组相比,模型组HNF-4α、FⅩ水平明显下调,miR-29b-3p在TIC大鼠中明显上调(P＜0.01);细胞实验显示,miR-29b-3p mimics及miR-29b-3p inhibitor对肝细胞增殖无明显影响(P＞0.05),miR-29b-3p mimics可明显下调HNF-4α、FⅩ表达,miR-29b-3p inhibitor则可明显上调HNF-4α、FⅩ表达水平(P＜0.05).双荧光素酶报告基因实验显示,HNF-4α与miR-29b-3p之间存在靶向结合.HNF-4α过表达则可抵消过表达miR-29b-3p对FⅩ的抑制作用(P＜0.05).结论 miR-29b-3p在TIC大鼠中明显上调,可通过靶向HNF-4α介导调控FⅩ表达水平促进TIC进展.