换一批circVAPA通过miR-101a-3p/TEAD3轴促进Hippo通路抑制肝再生的机制研究
Mechanistic study on circVAPA promoting the Hippo signaling pathway to inhibit liver regeneration via miR-101a-3p/TEAD3 axis
摘要目的 探讨环状RNA(circ)VAPA通过miR-101a-3p/TEAD3轴促进Hippo通路抑制肝再生的分子机制.方法 构建70％肝切除再生小鼠模型,分析circVAPA、miR-101a-3p、TEAD3表达;利用siRNA或过表达质粒转染小鼠胚胎肝细胞BNL CL.2细胞,分为VAPA-NC组、VAPA-NC+miR-101a-3p mimic组、VAPA-NC+miR-101a-3p mimic-NC 组、VAPA-OE 组、VAPA-OE+miR-101a-3p mimic 组和 VAPA-OE+miR-101a-3p mimic-NC组.CCK-8法和流式细胞术分析肝细胞增殖、凋亡和细胞周期变化,免疫荧光染色分析YAP1核移位,实时荧光定量逆转录-PCR(qRT-PCR)分析Hippo通路关键基因表达,双荧光素酶报告基因实验验证circVAPA与miR-101a-3p、miR-101a-3p与TEAD3的靶向关系.结果 肝再生过程中circVAPA水平逐渐升高(P＜0.05),miR-101a-3p则先升高后下降(P＜0.05).miR-101a-3p过表达时细胞增殖速率最高(P＜0.05),但不影响细胞凋亡率(P＞0.05);过表达circVAPA对增殖速率和细胞凋亡无影响(P＞0.05),同时过表达circVAPA和miR-101a-3p时细胞增殖速率明显下降,而细胞凋亡明显增加(P＜0.05);过表达miR-101a-3p时细胞大量进入S期,同时过表达circVAPA和miR-101a-3p时细胞大量阻滞于G2/M期.Hip-po上游基因YAP1磷酸化水平在肝再生6 h明显升高(P＜0.05),随后快速下降,但过表达circVAPA和miR-101a-3p不影响p-YAP1水平和YAP1核移位情况(P＞0.05).Hippo下游基因CTGF和转录因子TEAD3表达水平在肝再生过程中先升高后下降(P＜0.05),CYR61无明显变化(P＞0.05);同时过表达circVAPA和miR-101a-3p后CTGF表达水平升高(P＜0.05);敲低或过表达circVAPA均不影响TEAD3的表达(P＞0.05),而过表达miR-101a-3p可明显抑制TEAD3表达水平(P＜0.05).双荧光素酶报告基因实验证实cir-cVAPA 与 miR-101a-3p、miR-101a-3p 与 TEAD3 存在靶向关系.结论 circVAPA 通过 miR-101a-3p/TEAD3轴促进Hippo通路抑制肝再生.
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