换一批
换一批茶树二氢黄酮醇4-还原酶基因的克隆、表达及功能分析
Clone, Expression and Functional Analysis of Dihydroflavonol 4-Reductase Gene of Tea Plant (Camellia sinensis)
摘要茶树二氢黄酮醇4-还原酶(dihydroflavonol 4-reductase, DFR)是儿茶素合成途径中的关键酶.本研究采用 RT-PCR 技术,获得了茶树二氢黄酮醇4-还原酶基因(CsDFR)的开放阅读框,它编码含347个氨基酸的蛋白质,推测分子量为38.69 kD,等电点为6.02.成功地将该基因重组到表达载体 SUMO 上,并在大肠杆菌 BL21中进行原核表达;优化了原核表达中诱导时间、诱导温度、IPTG 浓度;纯化出目的蛋白.利用 HPLC-MS 方法对重组蛋白进行了体外酶活检测,结果表明目的蛋白具有 DFR 酶活性,可催化 DHQ 和 DHM 的还原反应.
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