换一批人胶质瘤U251细胞异柠檬酸脱氢酶1基因转染条件的建立和验证
Establishment and verification of IDH1 gene transfection conditions in human glioma U251 cells
摘要目的 建立适用于U251细胞异柠檬酸脱氢酶1基因(IDH1)过表达的最佳转染方案,并通过筛选获得稳定转染的IDH1过表达人胶质瘤U251细胞系.方法 利用jetPRIME试剂将IDH1 Human Mutant ORF Clone和pCMV6-Entry Tagged Cloning Vector转染至U251细胞内.通过增殖实验获得筛选所用抗生素G418浓度,用该浓度筛选稳定的IDH1过表达和空白质粒转染成功的U251细胞.采用RT-PCR和Western blot实验验证转染实验和IDH1基因和蛋白的表达情况.结果 IDH1转染U251细胞株成功表达IDH1基因及IDH1蛋白,筛选及培养所需G418浓度为300 mg/L.IDH1转染组细胞表达IDH1基因及蛋白均高于空白质粒组(VCT组),差异有统计学意义(P<0.05),转染实验成功.结论 成功建立适用于U251细胞IDH1过表达的最佳转染方案,可通过筛选获得稳定转染的IDH1过表达和空白质粒对照的人胶质瘤U251细胞系.
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