换一批
换一批摘要目的:体外表达并纯化多囊蛋白1胞外区片段.方法:提取健康人肾组织总RNA,用一步法RT-PCR选择扩增编码多囊蛋白1胞外多拷贝区的2个cDNA片段,并将之克隆到融合蛋白表达载体pQE30中,转染含有阻遏质粒pREP4的大肠杆菌M15.异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白,用亲和层析法纯化.纯化产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳及蛋白质印迹分析鉴定.结果:克隆到2个编码多囊蛋白1胞外区的cDNA片段,其大小分别为502 bp和471 bp.构建的表达质粒pQE30-PKD1e1和pQE30-PKD1e2经限制性内切酶酶切和DNA测序证实为所需要的质粒.表达出相对分子质量分别为19 800、18 900的融合蛋白,经蛋白质印迹分析鉴定为多囊蛋白1的融合蛋白.结论:本实验克服了PKD1基因在体内多个同源序列的干扰,克隆了编码多囊蛋白1胞外多拷贝区的cDNA序列,并成功地获得了融合表达的目的蛋白,为进一步制备抗多囊蛋白1胞外区的抗体创造了条件.
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分类号
R692
栏目名称
专题报道
DOI
10.3321/j.issn:0258-879X.2003.01.006
发布时间
2004-01-08
基金项目
国家科技攻关项目
国家自然科学基金
上海市优秀学科带头人项目
上海市重点基础研究项目
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