换一批胶质细胞源性神经营养因子受体α1定点突变体制备及其稳定转染细胞株的构建及鉴定
Preparation of GFRα1 mutants and establishment of PC12 cell line stably expressing constructed mutants
摘要目的:制备胶质细胞源性神经营养因子受体α1(GFRα1)的突变体质粒,并建立rGFRα1各突变体和RET基因双转染的稳定RCE细胞株.方法:通过Fugene6脂质体转染试剂,将PCR法快速制备的pcDNA3-rGFRα1突变体质粒分别与带潮霉素B抗性筛选标记的pcDNA3.1-RET质粒共转染野生型PC12细胞,建立rGFRα1各突变体和RET基因双转染的稳定PC12细胞株.经Western印迹和细胞免疫荧光化学方法对转染入PC12细胞中的各rGFRα1突变体基因和RET基因的表达进行鉴定.结果:Western印迹和细胞免疫荧光化学方法检测均证实了所构建的细胞株中有转入基因的正确表达.结论:成功构建了rGFRα1各突变体基因和RET基因同时转入表达的稳定细胞株,为研究rGFRα1中关键氨基酸的位点参与胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)信号转导的作用奠定基础.
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医学主题词
细胞(Cells)胶质细胞源性神经营养因子受体(Glial Cell Line-Derived Neurotrophic Factor Receptors)突变(Mutation)转染(Transfection)基因(Genes)
分类号
Q813.1（细胞工程）
栏目名称
DOI
10.3321/j.issn:0258-879X.2004.10.011
发布时间
2004-11-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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