换一批IgA亲和体随机组合噬菌体文库的构建和体外分子进化
Construction of phage-displayed random combinatorial library of IgA affibodies and its directed in vitro evolution
摘要目的 构建IgA亲和体随机组合文库并进行体外分子进化,研究IgA亲和体分子结构与功能的关系.方法 基因合成两个IgA亲和体片段.3′ 端引入3个随机连接肽序列随机连接,克隆于噬菌粒展示载体pCANTAB5S,构建噬菌体展示随机组合分子文库.以人IgA为靶分子对该文库进行4轮亲和筛选.制备阳性筛选克隆的单克隆噬菌体,用ELISA鉴定IgA结合活性.结果 成功构建噬菌体展示IgA亲和体随机组合分子文库,库容量为3.4×10~7,滴度为1.6×10~(12) TU/L,阳性克隆占79%以上,序列分析IgA亲和体随机连接,随机连接肽序列呈随机分布.在人IgA分子诱导的分子进化过程中,展示多个IgA亲和体串联体的噬菌体比例明显增加,获得3种新型IgA亲和体组合分子结构形式:IgA亲和体二联体、三联体和四联体.ELISA结合实验表明IgA亲和体三联体和四联体的IgA结合能力远大于单体和二联体.结论 通过构建IgA亲和体噬菌体展示随机组合文库和体外分子进化的方法,获得多种新型组合分子,其中IgA亲和体三联体和四联体的IgA结合能力明显增加,提示通过有效的分子进化成功地获得了高亲和力的IgA结合分子.
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关键词
肽库免疫球蛋白A亲和体串联重复序列亲和力分子进化peptide libraryimmunoglobulin A affibodytandem repeat sequencesaffinitymolecular evolution
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DOI
10.3724/SP.J.1008.2010.00001
发布时间
2010-03-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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