醛固酮抑制肾小球系膜细胞的自噬激活加速其在氧化应激状态下的凋亡

Aldosterone inhibits autophagy activation of mesangial cells and accelerates cell apoptosis under oxidative stress condition

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摘要目的探讨醛固酮对肾小球系膜细胞自噬激活的影响.方法通过3种经典的自噬活性检测方法检测醛固酮对体外培养的系膜细胞自噬的影响:(1)蛋白质印迹法检测不同浓度的醛固酮干预肾小球系膜细胞系(HMCL)后自噬相关的蛋白标记物LC3、SQSTM1/P62的表达水平变化;(2)向系膜细胞系转入GFP-LC3的真核表达质粒,用激光共聚焦显微镜观察醛固酮干预下系膜细胞荧光自噬点数量的变化并进行统计学分析;(3)通过电子显微镜观察醛固酮干预下系膜细胞自噬泡数量的变化并进行统计学分析.通过光镜下形态学观察及蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)剪切体的表达情况,分析醛固酮干预下系膜细胞在过氧化氢刺激后凋亡水平的变化.结果 3种方法均证实高生理剂量醛固酮可以抑制系膜细胞自噬激活:(1)10-7 mol/L醛固酮干预12 h后自噬标记蛋白LC3 Ⅰ向LC3Ⅱ转化减少约40％;(2) 10-7mol/L醛固酮干预12 h能够降低饥饿及雷帕霉素诱导的系膜细胞自噬点数量,降低的比率分别为60％和47％;(3)醛固酮干预后可减少饥饿和雷帕霉素诱导的系膜细胞自噬泡的增加.10-7 mol/L醛固酮干预系膜细胞12 h后接受过氧化氢2.5×10 6 mol/L刺激较对照组细胞凋亡的比率明显增加(P＜0.05).结论高生理浓度的醛固酮能够抑制系膜细胞的基础自噬激活并促进系膜细胞在氧化应激条件下的凋亡.