摘要目的 探讨血管平滑肌细胞在钙化过程中的细胞分型以及变化,寻求治疗心血管钙化的靶点.方法 动物实验:将C57BL/6J 小鼠随机分成对照组(CTL组,采用普通饮食喂养 4 周)和钙化组(CM组,采用高脂肪高嘌呤饮食喂养 4 周,腹腔注射 10 mg/kg 维生素D、连续注射 2 周),每组 3 只.采用单细胞测序法研究小鼠主动脉平滑肌细胞基因表达.细胞实验:将原代大鼠平滑肌细胞分为CTL 组(用含 10%FBS和 1%青霉素的DMEM培养)和CM 组(用含 10 mmol/L 的甘油磷酸钠和 3 mmol/L CaCl2 的DMEM培养),通过qPCR 检测和蛋白质印迹法评估平滑肌细胞基因表达.结果 在平滑肌细胞由收缩样表型向成骨样表型转变时,通过单细胞测序鉴定出 13 个新细胞分型.对 2 组小鼠主动脉平滑肌细胞的差异表达基因分析显示,G蛋白信号调节因子 2(GPSM2)+平滑肌细胞表达程度变化最大,拟时序分析显示钙化过程中GPSM2+平滑肌细胞簇向鞘氨醇 1 磷酸酯受体 3(S1PR3)+平滑肌细胞簇转化.京都基因与基因组百科全书分析显示,S1PR3+平滑肌细胞簇钙化过程中MAPK信号通路激活.蛋白质印迹法检测结果进一步证明钙化环境刺激ERK1/2 磷酸化增加.结论 在钙化条件下,血管平滑肌细胞由GPSM2+平滑肌细胞簇向S1PR3+平滑肌细胞簇转化,提示S1PR3+平滑肌细胞簇可作为治疗心血管钙化的靶点.
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