换一批基于CRISPR/Cas9技术构建HNF4A-EmGFP-P2A-blasticidin报告人胚胎干细胞系
Establishment of an HNF4A-EmGFP-P2A-blasticidin reporter human embryonic stem cell line using CRISPR/Cas9 technology
摘要目的 开发一种简便、高效的基于CRISPR/Cas9的基因编辑策略,以推动人多能干细胞在基础研究及再生医学中的应用.方法 采用基于脂质体转染试剂Lipofectamine? 3000的CRISPR/Cas9基因编辑方法,以人胚胎干细胞(hESC)为模型,在肝细胞核因子4α(HNF4A)基因定点敲入祖母绿绿色荧光蛋白(EmGFP)-P2A-杀稻瘟素(blasticidin)报告模块,通过优化脂质体转染条件并结合双重抗性筛选策略以及Sanger测序分析,获得纯合编辑克隆.最后将该报告细胞系进行肝向诱导并检测分化过程中EmGFP信号.结果 该方法成功实现了在hESC中的高效基因敲入,并获得纯合编辑克隆.肝向分化结果表明,该报告细胞系可特异性激活EmGFP荧光信号,且其表达与肝细胞标志物白蛋白和甲胎蛋白同步.结论 本研究建立了一种使用脂质体瞬时转染CRISPR/Cas9与供体质粒载体的便捷策略,获得了 HNF4A-EmGFP-P2A-blasticidin报告hESC细胞系,且该细胞系可用于示踪hESC的肝细胞分化.
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关键词
人胚胎干细胞基因编辑CRISPR-Cas9系统同源重组肝细胞核因子4αhuman embryonic stem cellsgene editingCRISPR-Cas9 systemshomologous recombinationhepatocyte nuclear factor 4 alpha
栏目名称
DOI
10.16781/j.CN31-2187/R.20250632
发布时间
2026-05-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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