摘要目的原核表达大肠癌负相关基因ST13,制备ST13蛋白单克隆抗体,研究人大肠等组织中表达的ST13蛋白的生物学特性.方法将ST13 ORF克隆至GST融合蛋白表达质粒,原核表达并以Glutathione纯化GST-ST13蛋白,以凝血酶切得到ST13蛋白.以GST-ST13融合蛋白免疫小鼠,以ST13蛋白筛选杂交瘤细胞株,按杂交瘤技术制备ST13蛋白单克隆抗体,并以ST13蛋白亲和层析纯化单抗.以该单抗作Western-blot及免疫组化检测临床标本.结果蛋白表达和纯化以SDS-PAGE证实.融合蛋白表达量占大肠杆菌总蛋白20%,每升培养物回收融合蛋白2.5mg,纯度为91.3%.建立了3个STl3蛋白单抗的杂交瘤细胞株,腹水中单抗的ELISA效价达104～105,并具有对STl3蛋白的高度特异性.Western-blot证实组织细胞中天然STl3蛋白的SDS-PAGE表观分子量约50KD,比其计算分子量大约10KD,但无糖基化修饰.免疫组化表明该蛋白均匀分布于SW480细胞及大肠上皮细胞浆,计算机分析系亲水性分子.免疫组化还表明该蛋白可表达于大肠、胃及肝等多种组织上皮,但在各种正常组织和肿瘤组织之间,正常组织之间,以及肿瘤组织之间的的着色强度不一.结论原核表达了STl3蛋白,制备了相应的单抗,建立了检测组织标本中STl3蛋白的方法.研究表明人组织STl3蛋白系表观分子量50KD的细胞浆可溶性分子,可表达于大肠等多种上皮组织.STl3蛋白在大肠癌组织呈低表达,在多种正常和肿瘤组织中的表达程度不一.cDNA同源性及蛋白质特性比较表明STl3与Hip(hsp70-interacting protein)为同一蛋白质,提示STl3/Hip经Hsp70等分子伴侣途径而在大肠癌发生发展中起作用.