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Cas9-CRISPR敲除hae3基因对斑马鱼血红蛋白生成的影响

Effect of knocking out hae3 gene using Cas9-CRISPR on hemoglobin of zebrafish Danio rerio

摘要为获得hae3基因缺失的突变体,并研究hae3基因对血红蛋白生成的影响,以斑马鱼Danio rerio为研究对象,利用Cas9-CRISPR技术,成功建立了缺失血红蛋白hae3基因的鱼类模型,采用显微注射技术将hae3 sgRNA与Cas9 RNA混合后对斑马鱼第一细胞期受精卵动物极进行注射,利用序列测定与比对、T7核酸酶酶切方法成功检测到了hae3基因的敲除,并对缺失hae3基因的斑马鱼和对照组斑马鱼同时进行固蓝(O-dianisidine)染色.结果表明,与对照组相比,试验组斑马鱼血红蛋白含量明显下降,并有畸形表型.研究表明,胚胎时期hae3基因的缺失会严重影响斑马鱼血红蛋白的生成,而且伴随畸形发育表型.

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