大鼠骨髓间充质干细胞体外 CFSE 染色标记的实验研究
CFSE fluorescence staining of rat bone marrow mesenchymal stem cells in vitro
摘要目的:建立大鼠骨髓间充质干细胞( BMSCs )体外分离、培养、羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)荧光标记的实验方法。方法差速贴壁离心法分离纯化大鼠BMSCs,并进行表面标志物流式检测鉴定和成脂、成骨分化鉴定。 CFSE标记BMSCs ,荧光显微镜下观察BMSCs 形态和标记率,台盼蓝染色检测CFSE对BM-SCs存活率的影响,以筛选CFSE标记BMSCs的最佳条件。结果第5代BMSCs的特异性表面标志物: CD29阳性,阳性率为90.10%;CD90阳性,阳性率为96.61%;CD45阴性,仅0.40%表达。且BMSCs具有成脂和成骨分化能力。10μmol/L CFSE作用15 min时,BMSCs的CFSE标记率几乎达到100%,且对BMSCs 的活性没有影响(P>0.05)。结论利用差速贴壁法可获得纯度高、未分化性能强的BMSCs,BMSCs标记CFSE的最佳条件为10μmol/L CFSE作用15 min。
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