内皮抑素重组腺病毒表达载体的构建及其对血管内皮细胞增殖特性的影响

Construction of recombinant adenovirus vector expressing human endostatin and its effect on characteristics of human dermal microvascular endothelial cell proliferation

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摘要目的构建含有人内皮抑素(endostatin,ES)基因的重组腺病毒Ad/hEnd,并探讨与感染该病毒的角朊细胞共培养时内皮细胞增殖特性的改变.方法以人胎肝组织mRNA为模板,通过RT-PCR及PCR获得ES基因序列,插入到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,获得重组质粒pAdTrack-ES.经鉴定后将阳性重组子转化至pAdeasy1受体菌,筛选阳性克隆.脂质体介导转染293细胞,获取Ad/hEnd,经PCR鉴定及上清中ES含量检测后,感染角朊细胞,并采用套皿法与内皮细胞共培养,测定培养液中ES含量、内皮细胞凋亡及细胞抑制率.结果成功获取Ad/hEnd,病毒滴度可达1.65×1012 pfu/L.感染Ad/hEnd的角朊细胞可有效表达并分泌ES,连续培养3 d后,培养液中ES含量可达226 ng/ml;与转基因角朊细胞共培养的内皮细胞凋亡百分数与抑制率分别为(32.7±7.1)%、(60.5±8.3)%,均显著高于对照组[(7.3±2.0)%、(13.8±1.6)%],(P＜0.01).结论与内皮细胞共培养时,转Ad/hEnd角朊细胞可通过分泌ES促进内皮细胞凋亡,并抑制其增殖.