换一批
换一批摘要目的 构建含有人肠三叶因子 (intestinal trefoil factor,hITF)启动子的荧光素酶表达载体,并检测启动子活性.方法 采用PCR 技术从LS-174T细胞基因组DNA中扩增出长约2.5 kb的含hITF基因启动子片段(-233 1/+53),而后在此基础上构建了10个不同长度的启动子序列至pGL-3 basic荧光素酶表达载体,然后将这些重组质粒转染HEK-293 细胞并在48 h后检测其荧光素酶活性.结果 插入的hITF启动子片段测序结果 显示正确,-500/+53,-400/+53和-300/+53片段活性介于0.023～0.026之间,-200/+53,-100/+53和-50/+53活性介于0.003 2～0.004 2之间,明确了最小活性功能域位于-300/+53区域,-300/-200区域对hITF转录起始起关键性作用.结论 成功构建了含hITF启动子的萤火虫荧光素酶报告基因质粒, 鉴定出人肠三叶因子(hITF)启动子活性位于-300/-200区域.
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栏目名称
论著
发布时间
2010-07-06
基金项目
国家自然科学基金重点项目
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