三丁基过氧化氢通过调控细胞周期诱导Sca-1+造血干/祖细胞衰老
Tert-butylhydroperoxide induces aging of Sca-1 + hematopoietic stem and progenitor cells by regulating cell cycle
摘要目的 探讨三丁基过氧化氢(t-BHP)诱导Sca-1+造血干/祖细胞(HSC/HPC)衰老的细胞周期调控机制。方法免疫磁性分选法分离纯化小鼠Sca-1+ HSC/HPC后分为对照组(常规培养细胞),衰老模型组(用t-BHP复制细胞体外衰老模型)。通过衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色、细胞周期测定和造血祖细胞混合集落(CFU-Mix)培养观察t-BHP诱导Sca-1+ HSC/HPC衰老的生物学作用;RT-PCR检测衰老相关基因p16INK4a、p19Arf、p53、p21Cipl/Wafl mRNA的表达。Western blot检测细胞周期调控蛋白P16INK4a、P21Cipl/Wafl、CyclinD1、Cyclin E、CDK4、CDK2的表达。结果免疫磁性分选法分离纯化的Sca-1+ HSC/HPC纯度可达(87.33±1.25)%。衰老组细胞SA-β-Gal染色阳性率为(57.9±4.2)%,高于对照组[(9.1±2.4)%,P<0.05],G0/G1期细胞比例为(87.53±4.03)%,高于对照组[(72.26±3.40)%,P<0.05],生成造血祖细胞混合集落(CFU-Mix)数为(1.5±1.2)/104,低于对照组[(9.8±2.1 )/104,P<0.05]。与对照组比较,衰老组细胞p16INK4a、p19Arf、p53、p21 Cipl/Wafl mRNA及P16INK4a、P21Cipl/Wafl、CyclinD1蛋白表达上调(P<0.05),Cyclin E、CDK4、CDK2蛋白表达下调(P<0.05)。结论t-BHP能有效诱导Sca-1+ HSC/HPC衰老,其机制可能与调控细胞周期调控分子的表达有关。
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