换一批
换一批尖吻蝮蛇AaHⅣ催化结构域和非催化结构域免疫保护性比较
Expression, purification and immunoprotection analysis of catalytic domain and non-catalytic domain of AaHⅣ from Agkistrodon acutus
摘要目的 表达尖吻蝮蛇出血性P-Ⅲb型金属蛋白酶AaHⅣ催化结构域和非催化结构域,并鉴定其免疫小鼠后抗体的中和保护性.方法 采用基因合成的方法合成尖吻蝮蛇P-Ⅲ6型金属蛋白酶AaHⅣ的催化结构域和非催化结构域cDNA,分别重组在质粒pET28a(+)上,转入BL21(DE3)中表达,产物经亲和层析纯化.昆明小鼠随机分为催化结构域蛋白免疫组、非催化结构域蛋白免疫组、AaHⅣ免疫组、PBS免疫组,每组6只[4周龄,体质量(20 ±2)g,雌雄各半],3次免疫后分离血清,与AaHⅣ体外孵育后行出血中和实验.结果 ELISA显示重组表达的AaHⅣ催化结构域和非催化结构域均具有免疫原性.出血中和实验显示:催化结构域免疫组和非催化结构域免疫组均较PBS免疫组显著减少出血面积(P ＜0.05);AaHⅣ免疫组与催化结构域免疫组之间无统计学差异(P＞0.05),而与非催化结构域免疫组之间存在统计学差异(P＜0.05).结论 AaHⅣ催化结构域免疫小鼠产生的抗体在中和AaHⅣ出血毒性方面效果更为显著.
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