骨形态发生蛋白2对体外培养肠神经嵴干细胞的调控作用

BMP2 regulation of rat enteric neural crest stem cells in vitro

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摘要目的研究体外培养肠神经嵴干细胞(enteric neural crest stem cells,ENCSCs)的方法,以及骨形态发生蛋白2 (bone morphogenetic protein 2,BMP2)对ENCSCs增殖、迁移的作用,揭示BMP信号通路在先天性巨结肠发生、发展中的作用.方法 ①机械分离法和酶消化法从SD大鼠的胎鼠肠道组织获取ENCSCs,免疫荧光法鉴定干细胞特性和多向分化能力;②光镜计数法检测不同浓度BMP2,以及BMP2与胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophicfactor,GDNF)对ENCSCs增殖(成球率)的影响;③肠片三维立体培养观察BMP2及GDNF对ENCSCs迁移的影响.结果 ①成功从胎鼠肠道组织分离提取ENCSCs,于培养第8天可见神经球形成,并可反复传代培养;②将获得的ENCSCs反复传代后,采用免疫荧光检测其具有干细胞特性(P75 +/Nestin+)和多向分化能力[可以分化为成熟神经元(TUJ1+)、神经胶质细胞(GFAP+)和平滑肌细胞(αSMA+)],证实其为于细胞;③与对照组比较,BMP2可明显促进ENCSCs的增殖及迁移能力(P＜0.05),GDNF可以增强其生物学效应(P＜0.05).结论 ①成功获得ENCSCs,并证实其具干细胞干性和多向分化能力;②BMP2对ENCSCs的迁移、增殖具有明显的促进作用.