人脐带间充质干细胞联合富含血小板血浆促进大鼠跟腱损伤的修复
Synergistic effect of human umbilical cord mesenchymal stem cells and platelet-rich plasma on promoting healing of Achilles tendon injury in rats
摘要目的 探讨不同浓度富含血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)在体外对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)增殖、分化的影响,评估hUC-MSCs联合PRP对大鼠跟腱损伤修复的影响.方法 PRP活化后成为PRP-clot releasate (PRCR).取P3代hUC-MSCs于培养皿中培养24h后,分别加入含0%(对照组)、10%、20%、40% PRCR的DMEM/F12培养基,于第1、2、3、4天测定hUC-MSCs的增殖速度.P3代hUC-MSCs按相同分组培养,于第1、3、5天收集细胞并提取蛋白.Western blot检测hUC-MSCs中成肌腱分化标志性基因肌腱蛋白C(tenascin c,TNC)、SCX (scleraxis)、Ⅰ型胶原的表达.选取48只8周龄雄性SD大鼠,Ⅰ型胶原酶溶液50μL注射于大鼠右侧跟腱制备跟腱损伤模型,3d后于损伤部位再次分别注射50μL生理盐水(对照)、hUC-MSCs悬液、PRP或PRP+ hUC-MSCs混悬液,术后2、4周安乐死大鼠,Western blot检测跟腱中TNC、SCX及Ⅰ型胶原的表达,跟腱切片HE染色行组织学评估.结果 PRCR在体外对hUC-MSCs增殖均有促进作用,20% PRCR组促增殖作用最显著(P <0.05);20% PRCR组较对照组在体外可以显著地促进hUC-MSCs成肌腱分化标志性基因的表达(P<0.05);术后2、4周,PRP+ hUC-MSCs组跟腱中成肌腱分化相关基因在蛋白水平表达更高,跟腱切片HE染色显示PRP+ hUC-MSCs组纤维排列更规整,炎细胞更少.结论 适宜浓度PRP在体外显著促进了hUC-MSCs的增殖、成肌腱分化;PRP联合hUC-MSCs能有效促进大鼠受损跟腱的修复.
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