钙库操纵性钙内流参与调节血管内皮细胞增殖与迁移

Store-operated calcium entry is involved in proliferation and migration of vascular endothelial cells

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摘要目的利用体外培养的人脐静脉血管内皮细胞,初步探讨钙库操纵性钙内流(storeoperated calcium entry,SOCE)对血管内皮细胞(endothelial cell,EC)功能的影响.方法培养于激光共聚焦培养皿的EC随机分为对照组和不同剂量(10、25、50、75、100 μmol/L)SOCE抑制剂(2-APB)干预组.干预组细胞以2-APB干预5 min后,检测各组细胞的SOCE强度(n=10).培养于6孔板的细胞,根据实验目的,随机分为对照组和不同剂量(50、75、100 μmol/L)的2-APB干预组.2-APB干预24h后,以CCK-8检测各组EC的增殖功能(n=9)、以Transwell培养法检测各组EC的迁移功能(n=10).2-APB干预2h后,以Griess Reagent方法检测各组EC的NO产量(n=6)以及用Western blot方法检测各组EC的eNOS变化(n=3).结果较低剂量的2-APB(10、25 μmol/L)对SOCE有抑制趋势,但无统计学意义(P＞0.05),较高剂量的2-APB(50、75、100 μmol/L)能够显著抑制SOCE (P ＜0.05).采用具有显著抑制作用浓度的2-APB(50、75、100 μmol/L)抑制SOCE后,能够显著抑制EC的增殖能力(与对照组比较,EC的增殖分别下降33.2％、46.3％和61.2％,P＜0.05)、迁移功能(与对照组比较,分别下降33.5％、54.3％和64.9％,P＜0.05)、NO产量(与对照组比较,分别下降40.5％、61.9％和73.1％,P ＜0.05)以及eNOS的合成(与对照组比较,75和100 μmol/L组分别下降45.1％和62.4％,P＜0.05).结论 SOCE参与调节EC的增殖和迁移功能,抑制SOCE能引起EC功能异常,此作用可能是通过抑制eNOS的合成实现.