载IR780靶向纳米粒体外荧光成像及光动力诱导大鼠脉络膜血管内皮细胞凋亡的研究

In vitro imaging of targeting fluorescent IR780 nanoparticles and their mediated photodynamics in rat choroidal endothelial cells

摘要目的制备一种新型载IR780靶向血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2)纳米粒(VEGFR2/IR780/PLGA-NPs),体外评价其物理性质、荧光成像能力、对大鼠脉络膜血管内皮细胞(rat choroid vascular endothelial cells,RCVECs)的寻靶能力及光动力治疗(photodynamic therapy,PDT)效果.方法采用超声乳化法制备包载IR780的非靶向纳米粒(IR780/PLGA-NPs),运用碳二亚胺法将VEGFR2抗体与纳米粒相连接,最终制备出靶向纳米粒(VEGFR2/IR780/PLGA-NPs);检测其基本特性;运用CCK-8法检测纳米粒的细胞毒性;定量荧光和生物发光成像系统评价纳米粒的荧光成像能力;激光共聚焦与流式细胞术评价靶向组、非靶向组、抗体封闭组纳米粒体外寻靶能力;单线氧荧光探针(singlet oxygen sensor green reagent,SOSG)评估体外光动力治疗效果;流式细胞仪检测靶向激光组、非靶向激光组、单纯激光组纳米粒介导的光动力诱导RCVECs的凋亡比例.结果成功制备出VEGFR2/IR780/PLGA-NPs,不同显微镜下观察呈球形,大小均匀,粒径(273.23±31.55) nm;电位(-8.85±1.60)mV;IR780包封率(87.37±2.44)％.荧光成像结果显示:纳米粒浓度越高,其荧光信号强度越强.CCK-8法检测结果显示纳米粒没有明显的细胞毒性.流式细胞仪检测VEGFR2抗体已成功连接于纳米粒,其连接率为(83.60±4.79)％.激光共聚焦观察发现在靶向组中RCVECs周围的纳米粒明显多于非靶向组和抗体封闭组.流式细胞仪检测发现靶向组纳米粒与细胞连接率为(58.13±1.64)％,明显高于非靶向组(20.64±1.89)％和抗体封闭组(15.12±1.16)％,差异有统计学意义(P＜0.05).经过激光辐照后,随纳米粒浓度增加,体外活性氧产量逐渐增加,具备良好的PDT能力.流式细胞仪检测发现靶向激光组诱导RCVECs凋亡的比例为(82.99±0.98)％,明显高于非靶向激光组(30.75±1.81)％和单纯激光组(7.05±0.96)％,差异有统计学意义(P＜0.05).证实靶向纳米粒具备更好的PDT效果.结论成功制备VEGFR2/IR780/PLGA-NPs,其在体外具有良好的靶向能力,同时可用于荧光成像以及光动力治疗.