换一批
换一批金黄色葡萄球菌巨噬细胞胞内生存关键分泌蛋白筛选体系的构建
Construction of a screening system for key intracellular survival proteins of macrophages of Staphylococcus aureus
摘要目的 建立金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)巨噬细胞胞内感染状态下分泌蛋白高通量筛选体系,探索金葡菌胞内生存所需关键分泌蛋白.方法 利用课题组建立的金葡菌分泌蛋白真核系统表达载体库,通过DNA转染表达技术,得到能够在细胞内表达金葡菌分泌蛋白的RAW264.7巨噬细胞阵列.金葡菌感染RAW264.7后,清除胞外菌,观察金葡菌胞内生存情况.最后通过构建相应分泌蛋白的过表达及敲除金葡菌验证筛选结果.结果 通过探索RAW264.7质粒转染剂量、金葡菌感染复数(multiplicity of infection,MOI)以及感染时间,确立筛选体系的最优质粒转染剂量为1.0μg/孔、MOI为1.0、感染时间为4 h.筛选结果结合相应分泌蛋白过表达和敲除菌株验证,成功筛选出hypothetical protein、Serine protease E等分泌蛋白具有促进胞内金葡菌生存功能.结论 成功构建金葡菌巨噬细胞胞内生存关键分泌蛋白筛选体系.
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栏目名称
基础医学
DOI
10.16016/j.2097-0927.202311091
发布时间
2024-06-11
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