YAP通过促进自噬抑制髓核细胞胞外基质分解代谢

YAP inhibits extracellular matrix catabolism of nucleus pulposus cells by promoting autophagy

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摘要目的探讨YAP对椎间盘髓核细胞的作用及其可能机制.方法收集重庆医科大学附属第一医院2021年3月至2022年7月接受腰椎手术患者的相对正常和退变的椎间盘组织,采用免疫组化和Western blot检测YAP在人椎间盘髓核组织中的表达差异.体外培养人原代髓核细胞,通过IL-1β处理诱导髓核细胞退变,将实验分为对照组、IL-1β组、IL-1β+LV-YAP组、IL-1β+YAP-siRNA组和IL-1β+LV-YAP+3-MA组.采用Western blot检测细胞外基质分解代谢及自噬水平变化.最后建立大鼠椎间盘退变模型,利用MRI、阿利新蓝染色及免疫组化检测YAP和LC3的表达及椎间盘退变情况.结果 YAP在退变椎间盘组织的表达水平明显低于相对正常的椎间盘组织(P＜0.05).体外细胞实验结果显示,IL-1β+LV-YAP组显著提高IL-1β诱导的髓核细胞中Collagen Ⅱ、Aggrecan和LC3-Ⅱ的蛋白表达(P＜0.05),降低MMP-3和MMP-13的蛋白表达(P＜0.05),而IL-1β+YAP-siRNA组则表现出完全相反的作用.而予以自噬抑制剂3-MA预处理后明显降低IL-1β+LV-YAP组中GFP-LC3阳性颗粒数量和 Collagen Ⅱ、Aggrecan、LC3-Ⅱ 蛋白表达(P＜0.05),且提高 MMP-3 和 MMP-13 的蛋白表达(P＜0.05).进一步在体内构建大鼠椎间盘退变模型,YAP过表达促进LC3表达和抑制椎间盘退变.结论 YAP过表达通过促进人髓核细胞自噬抑制细胞外基质降解,从而延缓椎间盘退变.